A comparative study on digestible characteristics of denatured proteins by molecular sieve HPLC


Lee, J.Y.; Park, J.L.

Korean Journal of Dairy Science 12(3): 267-276

1990


In order to compare the digestible characteristics of native and denatured proteins, ß-lactoglobulin, alpha-lactalbumin and bovine serum albumin were denatured by heat treatment, heat treatment in fructose and alkali treatment, individually. The native and the denatured proteins were hydrolysed by the sole immobilized pepsin, and digested by the immobilized trypsin, chymotrypsin and pronase successively and then the peptides produced by digestion were separated by molecular sieve HPLC. The results obtained were summarized as follows: 1. In molecular sieve HPLC diagrams, the native ß-lactoglobulin, alpha-lactalbumin and bovine serum albumin were appeared a single peak, but their retention times were different individually. 2. Denaturations of ß-lactoglobulin, alpha-lactalbumin and bovine serum albumin by heat treatment, by heat and fructose treatment, and by alkali treatment, changed the elution time and the number of their eluted protein peak individually. 3. Digestion of native and denatured proteins on immobilized enzyme system prolonged the elution time, and increased the number of eluted peptide groups produced by hydrolysis of them. But according to the types of treatment and the kinds of protein, changes of the number of peak and of the degree of released time were appeared individually various different tendencies.

Korean
J.
Daiy
Sci.
12
(3)
:
267
-'276,
1990
Molecular
Sieve
HPLC방법에
의한
변성된
단백짙들의
소화특성
비교
·
경북내학교
농과대학
낙농학과
A
Comparative
study
on
digestibile
characteristics
of
denatured
proteins
by
molec미ar
sieve
HPLC.
J.
V.
Lee
andj.
L.
Park
Dept.
of
Dairy
Sci.
Kyungpuk
National
University
SUMMARY
In
order
to
compare
the
digestible
characteristics
of
native
and
denatured
proteins,
I3-
lacto-
globulin,
a-
lactalbumin
and
bovine
serum
albumin
were
denatured
by
heat
treatment,
heat
treat-
ment
in
fructose
and
alkali
treatment,
individually.
The
native
and
the
denatured
proteins
were
hydrolysed
by
the
sole
immobilized
pepsin,
and
digested
by
the
immobilized
trypsin,
chymotryp-
sin
and
pronase
successively
and
then
the
peptides
produced
by
digestion
were
separated
by
mole-
cular
sieve
HPLC.
The
results
obtained
were
summarized
as
foollow;
1.
In
molecular
sieve
HPLC
diagrams,
the
native
/3-
lactoglobulin,
a-
lactalbumin
and
bovine
serum
albumin
were
appeared
a
single
peak,
but
their
retention
times
were
different
individually.
2.
Denaturations
of
13-
lactoglobulin,
a-
lactalbumin
and
bovine
serum
albumin
by
heat
treatment,
by
heat
and
fructose
treatment,
and
by
alkali
treatment,
changed
the
elution
time
and
the
number
of
仕ieir
eluted
protein
peak
individually.
3.
Digestion
of
native
and
denatured
proteins
on
immobilized
enzyme
system
prolonged
the
elution
time,
and
increased
the
number
of
eluted
peptide
groups
produced
by
hydrolysis
of
them.
But
according
to
the
types
of
treatment
and
the
kinds
of
protein,
changes
of
the
number
of
peak
and
of
the
degree
of
released
time
were
appeared
individually
various
different
tende-
cies.
(Key
words;
i3-
lactoglobulin,
a-
lactalbumin,
bovine
serum
albumin,
denaturation,
HPLC
dipestible
characteristics)
.
-267-
-
I
.
단백질을
구성하고
있는
20여종의
아미노산듈
각각
특성이
다른
기능기를
가지고
있어
외부
환경의
변화에
따라
복잡한
물리
·
화학적
반응을
유발할
있고,
그-
결과로
전체
단백질의
구조상에
변화가
생기게
되면
식풍중의
단백질은
소화과정에
소화효소애
의해
가수분해될
있는
위치에
변화를
가져올
수가
있다.
식풍의
가공처리
꽈정에는
식품중의
단백질
자의
주위환경에
여러가지
형태
(祗
,
열처리
,
카리등)
변화를
일으킬
있고,
아미노산
주위
pH
,
전기적
성질들의
변화로
α-위치의
탄소
결합된
수소이온이
이탈하게
되면
β-
elimina-
tion이
일어나
아미노산으로서의
기능을
상실하
되고
(racemization)
,
이러한
현상은
아미노산
가지고
있는
기능기의
전기적
성질이나
전체
단백질의
구조상의
특성에
따라
좌우되며
(Master
and
Friedman.
1979)
,
dehydroalanine의
이중결
합과
lysine의
e
-imino
group이
결합함으로서
성되는
lysinoalanin
(LAL)
소화기관이나
41
경계통의
세포에
나쁜
영향을
미치는
독성물질
로서
알려지고
있고
,
LAL의
생성은
이물질
체의
독성효과
보다는
LAL의·
'
생성으로
인하여
이의
생성에
콴여한
아미노산듈이
이용될
때문쎄 단백질의
"양가치가
낮아진다고
점이
더욱
주시해야
점이다
(Wolf등
.
1977)
.
LAL의
생성에
관계하는
dehydroalanine을
생성
있는
아미노산들은
Cysteine,
Cystine,
Serine
o
-
phosphoserine
$
o
-
glycoserine등의
β-elinimation의
결과로서
일어난다고
보고되고
있다
(Finley등
,
1977,
1978;
Sen등
,
1977)
.
단백
질이
당과
같이
있을
켱우쎄
일어날
있는
Ma-
illard
반응의
결과로
생성되는
Mellanoidin이라
지칭되는
색소물질들은
-NH2을
가진
아미노
,
peptide
,
단백질
등이
케톤기나
알데히드기를
가지는
당이
,
환원되
이같은
작용기를
생성
밌는
당과같이
있을
경우쎄
서로
복잡한
축합
,
중합과정을
거쳐
최종척으로
갈색의
색소
물질을
생성하게
됨으로
반응의
과정에
콴여
아미노산이
당은
원래의
기능을
상실하게
되어
이용가치
낮아질뿐
아니라
소화효소에
소화율쎄도
영향을
미칠수
있다
(Knipfel
등,
1977;
Brien4
Morrisey,
1989)
.
아미노산의
기능기에
-COOH기를
가지고
아미노산인
glutamic산꽈
aspartic산은
lysine
-NH2
group
6J
서로
결합할
(Cross
link)
있고
그-
결과로
단백질
분자구조상에
변화를
져와
단백질의
소화율을
감소시킬수
있는
요인
되고
있다
(Erbersdobler,
1977)
.
연구꼐서는
가공처리
과정에
일어날
있는
여러가지
형태의
단백질의
변성이
단백질
소화효
소에
의한
탄액질의
가수분해
과정에
어떠한
이가
있는가를
규명하기
위하여
순수분리된
β-
lactoglobulin,
a_
lactalbumin과
bovine
serum
albumin등을
아무런
처리를
하지
않은
신선한
상태의
단백질과
단순열처리
,
당과
열처리
,
알카
리처리
등의
방법으로
각각
처리하여
변성된
백질
등을
고정화
소화효소
장치를
사용하여
수분해
시켰을
생성되는
peptide
group들을
HPLC
방법으로
분리하여
그-
결과를
서로
비교
하여
보았다.
L
[
.
재료
방법
1
.
시험재료
.
단백질의
종류
시험용
재료로
사용된
단백질듈은
순수분리된
$-lactoglobulin
(Sigma
Chem.
Co.
),
a-
lactalbu-
lin
(Sigma
Chem.
Co.
),
Se
rum
albumin
(Sigma
Chem.
Co.
)올
구입하여
사용하였다.
.
소화효소
Pepsin
(Sigma
Chem.
Co.
),
Trypsin
(Sigma
Chem.
Co.
),
Chymotrypsin
(Sigma
Chem.
Co.
),
Pronase
(Sigma
Chem.
Co.
)
등을
고정화
소화효
장치를
만드는데
사용하였다.
.
효소의
고정화
Porous
glass
bead
(120/
200
Sigma
Chem.
Co.
)
지지제로
사용하였고
,
3-
aminopropyltrietyo-
xylane
(Sigma
Chem.
Co.
),
Succinic
anhydride
(Sigma
Chem.
Co.
),
EDC
(1-
ethyl-
3
(3-
dime.
thylaminopropyl)
-arbodiamide
(Sigma
Chem.
Co.
)
등을
사용하여
효소를
고정화
시켰다.
-268-
라.
고정화
효소의
활력측정
GGPE
(Giy-
Gly-
Phe-
-Phe-
Oet
(Vega
Biochem.
Co.
)),
TAME
(Toluensulfonyl-
L
-
Arginine
Me-
thyl-
Ester
(Vega
Bioc
hem.
Co.
)),
BTEE
(Benzoyi
-
L-
Tyrosine-
Ethyl
-
Ester
(Vega
Biochem.
Co.
)),
Leu-
Giy.
(Vega
Biochem.
Co.
)
등을
기질로
용하여
활력을
측정하였다.
2
.
시험방법
.
단백질의
변성
1)
신선한
단백질은
분말상태의
단백질을
0.
02
M
phosphate
buifer
(pH
7.
0)
용해한
(3mg
/ml)
lOml에
6%
sodium
azide
soL
0.
15ml을
가하고,
1-
NHCI
용액으로
pH
2.
0으로
조절한
증류수로
최종
용량이
15
ml가
되노복
희석
하여
사용하였다.
2)
단순
열처리한
단백질은
위의
단백질
용액
(3mg/
mi)
lOmi을
유리
병에
넣고
밀봉한
후90
C
항온수조에서
2시간
이상
가열처리한
위와
같은
방법으로
희석하여
사용하였다.
3)
당과
열처리는
1)
단백질
용액에
과당
0.
5
M을
첨가한
2)
같은
방법으로
처리하
였다.
4)
알카리
처리는
분말상대의
단백질을
0.
2
M
NaOH
용액에
용해한
(3mg/
mi)
lOmi
유리
병에
넣고
밀봉하여
40
"C
항온수조에서
20시간
동안
가열하고
1-
NH
(그용액으로
중화한
1)
같은
방법으로
sodium
azide을
첨가하여
pH와
최종용량이
같도록
조절하였다.
.
소화효소의
고정화
활력측정
Pepsin,
trypsin
chymotrypsin과
pronase
Taylor
(1979)
방법에
따라
succino
-
amino-
pr이)
iy-
glass
bead에
EDC와
giutaraidehyde을
사용하여
고정화
하였고
,
고정화
효소의
활력은
micro
순환장치를
이용하여
측정하였다.
.
단백질의
가수분해
1)
Pepsin에
의한
가수분해
고정화
pepsin
bead
l00ui을
칼럼에
채운후
단백질
용액을
peristaltic
pump을
사용하여
20
시간
동안
순환시켰다.
2)
Trypsin,
chymotrypsin과
pronase에
의한
가수분해
Pepsin에
의해
가수분해된
액을
pH
7.
0으로
조절한
trypsiri,
chymotrypsin과
Pronase
bead을
단계적으로
열결한
순환장치를
통하여
20시
동안
순환시
켰다.
라.
High
performance
liquid
chromatography
TSK-
G3000
SW
칼럼을
사용하여
pH
6.
0의
0.
02
M
acetate
buffer에
NaCi을
0.
15M
가한
액을
전개용
완충액으로
하여
분리하였으며
U,
V.
detector을
斗용하여
peptide
group의
양을
280
nm에서의
흡광도의
차이를
자동기록계로서
gra-
phying하였다.
I
[
[
.
시험결과
고찰
Fig.
1에서는
가공처
과정에
일어날
있는
단백질의
변성
단백질의
분자구조상에
어떠한
영향을
미치는가를
조사하고쳐
β-
lactoglobulin,
a-
lactaibumin
J-
bovine
serum
albumin
선한
상태의
것과,
단순한
열처리
,
당과의
열처
리,
알카리
처리
등을
하여
변성시킨
단백질
등을
HPLC
방법으로
분리하여
차이룰
서로
비교하
보았다
.
아무런
처리를
하지
않은
신선한
단액
질의
경우쇄는
3종의
단백질이
모두
탄일한
peak
나타난
것으로
보아
실험에
사용된
단백질들
순수하게
정제된
것이였음을
확인할
있었
,
3
종의
단백질이
나타나는
시간
(retention
time)
서로
다른
것은
단백질들의
분자량
크기가
다르기
때문이다
(Hancock와
Sparrow,
1984)
.
순수한
단액질
용액을
단순하게
열처리만을했
경우꼐
β-
lactoglobuiin의
HPLC
diagram은
신선한
β-
iactoglobuiin의
peak와
비교했을
retention
time이
빠른
위치에
커단란
꺼의
peak가
나타난
것을
있었고
,
또진선한
보다
늦은
위치에도
개의
작은
peak가
나타
나는
것을
있었다
.
이러한
결꽈는
β니ac
-
togiobulin에
단순한
열처리에
의하여서도
같은
단백질
분자끼리
,
혹은
단백질
분자가
분해되
생성된
다른
peptide들과
같이
서로
sediment
a-
tion되어
원래의
신선한
단백질
분자보다
분자의
상태로
결합될
수도
있고
,
단백질
-269-
(1)
(2)
(3)
(4)
汁나…
1!
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F
뱁긔
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0
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5
0.
0
10
20
30
Elution
time
(mints)
fi
-
Lactoglobulin
40
10
20
30
40
Elution
time
(mints)
a-
Lactalbumin
10
20
30
40
Elution
time
(mints)
Blood
serum
albumin
Fig.
1.
Molecular
sive
HPLC
diagrams
of
proteins
(1)
Untreatment
(2)
Heat
treatment
(3)
Heat
treatment
fructose
(4)
Alkali
treatment
자상의
어느
위치에서
가수분해
일어나
원래
분자보다
분자량이
더욱
작아진
상태로도
나타
있다고
하는
것을
의미한다
.
a-
lactalbumin
단순한
열처리를
했을
때의
HPLC
diagram
신선한
것보다
retention
time이
빠른
위치에
개의
커다란
peak만을
볼수
있었고
단순
리를
serum
a1bumin의
경우에는
신선한
것보다
retention
time이
늦은
위치에
여러개의
작은
peak로
나타나는
것을
볼수
있었다
.
단순
열처리의
결꽈로
나타나는
각각의
변성된
백질들의
H
PLC
diagram이
나타나는
경향이
비숫한
경향을
나타내기는
하지만
서로
차이
있는
것은
단백질들의
분자구조상의
차이
같은
조건에서
처리를
할지라도
단백질의
성의
정도나
상태에는
차이
있을수
있기
때문
것으로
설명할
있다
(Gordon,
1971;
Mcke-
nzie,
1971)
.
단백질
용액에
당을
첨가한
상태에서
열처리
했을
경우쎄
β
-
lactoglobulin은
신선한
단백
질보다
retention
time이
빠른
위치에
커다란
개의
peak가
나타난
것을
볼수
있었고
,
늦은위
치에도
크고
작은
여러개의
peak가
나타난
것을
볼수
있었다
.
a-
lactalbumin의
경우에는
신선한
것보다
retention
time이
빠른
위치에
개의
커다란
peak와
그보다
빠른
시간대에
작은
peak가
나타난
것을
볼수
있었고
,
rete-
ntion
time이
늦은
위치에서는
크고
작은
여러
개의
peak가
나타난
것을
볼수
있었다
.
Serum
albumin의
경우쎄는
진선한
것에
비해
빠른
간버에
커다란
하나의
peak와
늦은
시간대에
작은
수개의
peak가
나타난
것을
볼수
있었
.
당과
열처리름
다백칠들의
HPLC
dia-
-270-
gram을
단순
열처리를
했을
경우의
HPLC
dia-
gram과
서로
비교해
보았을
같은
단백질이라
할지라도
단순
열처리를
한것과
당과
같이
열처
리를
한것과의
HPLC
diagram
상에
많은
차이가
있는
것을
알수
있었고
,
단백질의
종류에
따라서
그-
차이가
따양한
것을
알수
있었다
.
이와같
단백질의
열처리
과정에
첨가된
당에
의하여
단백질의
변성의
형태
다르게
나타난
것은
처리
과정에
당이
존재함으로서
단백질
분자들간
$edimentation이나
단백질분자상의
가수분해
되는
상태에도
영향을
미친
결과로
설명할
,
특히
α-lactalburnin의
경우에
단순한
열처
리를
했을
때에는
단백질의
가수분해
결과로
타날
있는
,
신선한
것보다
늦은
시간내에는
아무런
peak가
나타나지
않았으나
당과
열처리
했을
때에는
retention
time이
늣은
위치에
서도
수개의
peak가
나타나는
것은
열처리
과정
첨가된
당에
의하여서
단백질
분자상의
가수
분해
일어날
있도록
하는데
영향을
미친결
꽈로
설명할
있다
(Chung등,
1986;
Francies
,
1988)
.
단백질
용액에
1-
N
NaOH
용액으로
알카리
처리를
하였을
,
β
-
lactoglobulin은
신선한
보다
retention
time이
빠른
위치에
크기가
비숫
2개의
peak가
겹쳐서
나타난
것을
볼수
었고 ,
늦은
시간대에서는
아무런
peak도-
나타나
않았으며
,
serum
protein의
경우쎄는
여러개
peak가
겹쳐진
상태로
분산되어
나타난
것을
볼수
있었다
.
이러한
결과는
알카리
처리를
했을
9-
lactoglobulin과
α-
lactalbumin은
단백질
분자끼리
서로
결합할
수는
있으나
가수분해는
거의
일어나지
않는
것으로
설명할
있다
(Fi-
nley등,
1977,
1978)
.
Fig.
2,
3,
4에서는
단백질의
변성이
소화과정
어떠한
차이로
나타내는가를
조사하기
위하여
fi
-
lactoglobulin,
a-
lactalbumin과
serum
albu-
lin을
각각
신선한
것과
,
단순한
열처리,
당콰
처리
알카리
처리에
의하여
변성된
상대의
고정화
휄신을
통하여
24시간
동안
가수분해
시켰고
,
휄신에
의해
가수분해된
액을
다시
고정
트랖신
,
고정화
카이모트랖신과
고정화
pro-
nase을
단계적으로
순환시키면서
24시간
동안
가수분해
시킨후의
peptide
group들을
HPLC
방법으로
분리하고
차이를
서로
비교하여
았다.
Fig.
2에서
보는
바와
같이
변성되지
않은
β
-
lactoglobulin을
pepsin
bead을
통하여
가수분
시켰을
때의
HPLC
diagran〕
소화되치
것에
비하여
retenti아1time이
늦은
위치에
커다란
개의
peak와
그보다
더욱
늦은
대에
2∼3개의
작은
peak들이
나타나는
것을
있었고
.
펠산에
의해
소화된
트랖신
,
카이
모트랖신과
pronase에
의하여
다시
가수분해
켰을
때의
HPLC
diagran〕
휄신에
의해
소화된
것보다
더욱
늦은
간대에
크고
작은
수많은
peak가
나타나는
것을
볼수
있었다.
이와같이
소화가
진행되어감에
따라
peptide
group들의
retenti아i
time이
길어지고
그수와
타나는
모양도
서로
다양해
지는
것은
〃lacto-
mobulin의
분자장에
짚신에
의해
분해뇔
부위와
다른
소화효소들에
의해
분해될
부위가
서로
니르기
때문에
펠신에
의해
소화
이루어진
후에도,
다시
트랖신,
카이모트싶신
pronase등에
의하여
더욱
소화가
전행된
4
[
과인
것으로
설영된다
(Wolf등,
1977)
.
단순
처리
,
당과
열처리
,
알카리
처리
등쎄
의하여
떤성
성된
각각의
β-
lactoglobulin을
펨신과
E랖신,
카이모트랖신
,
pronase등쎄
의하여
차례
버로
수분해
시켰을
애의
I-
IPLC
diagran〕
역시
화가
진행되어감에
따라
retention
time이
길이
지는
것은
물론
나타나는
peak의
수와
모양노
다양하게
나타니숫
것을
볼수
있었고
,
呼성의
태가
다를
경우쎄도
소화가
진행됨에
띠과
나타
나는
peptide
group들의
양상에
서로
현저한
있는
것을
볼수
있다
.
이와같이
같은
단백질
이라
할지라도
처리방법을
다르게
했을
때의
백질의
소화과정ㅇ
나타나는
peptide
group의
수와
형대가
서로
다르게
나타나는
것은
단액질
변성의
형태가
서로
다르기
때문에
결과로
소화효소들에
의해
분해될
있는
단백질
분자
상의
위치에
어떠한
떤화가
발생되
단액질늬
소화되는
상태에도
영향을
미친
결과라고
생각
된다
(Hayasi와
Kameda,
1980;
Brin과
Morrisey
·,
1989)
.
-271-
(1)
까!
i;
l
r:
]
it
.1
i
1
-
0.
0
-ㅗ-
Untreatment
Alkali
treatment
(1)
(2)
(3)
-
-
-
小H
]뗘1
0.
5
U
’ㅢ
1
40
(mints)
10
20
Elution
time
UJ
-
l
斗;
「!
!'l]
'
ㄱ∥’
.
l
0
0.
5
0.
0
1
10
Elution
time
Alkali
treatment
Heat
treatment
with
fractose
Fig.
2.
Molecular
sive
HPLC
diagrams
of
β
-lactoglobulin
hydrolysied
through
immobilized
enzyme
system
(1)
Non
-
hydrolysis
(2)
Hydrolyside
through
immobilized
pepsin
(3)
Hydrolysis
through
immobilized
pepsin,
trypsin,
chymotrypsin
and
pronase
-272-
!
(1)
3)
l
'
5
~
Ureatment
Heat
treatment
(1)
(2)
/
쐬1h
l
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F1
n
-
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.
1
I
'
1 _1
i:
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.
---뻐-
-
.4-
10
20
30
Elution
time
Alkali
treatment
40
10
20
30
40
(mints)
Elution
time
Heat
treatment
with
fructose
Fig.
3.
Molecular
sive
HPLC
diagrams
of
a-
lactalburnine
hydrolyside
through
immobilized
enzyme
system
(1)
Non-
hydrolysis
(2)
Hydrolysied
through
immobilized
pepsin
(3)
Hydrolysis
through
immobilized
pepsin,
trypsin,
chymotrypsin
and
pronase
-273
-나
(1)
(2)
(3)
니!
1
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Untreatment
Heat
treatment
(1)
(2)
(3)
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4
.
H끼
1l
10
20
30
Elution
time
Alkali
treatment
40
10
20
30
40
(mints)
Elution
time
Heat
treatment
with
fractose
Fig.
4.
Molecular
sive
HPLC
diagrams
of
bovine
serum
albumine
hydrolysied
through
immobilized
enzyme
system
(1)
Non-
hydrolysis
(2)
Hydrolysied
through
immobilized
pepsin
(3)
Hydrolysied
through
immobilized
pepsin.
trypsin,
chymotrypsin
and
pronase
-274-
Fig.
3과
4에서는
α-lactalbumin과
serum
albumin올
변성되지
않은
상태로
고정화
펨신,
고정화
트랖산
,
고정화
카이모트랖신과
고정화
pronase을
통하여
가수분해
시킨
것과
단순
처리
,
당과
열처리
,
알카리
등에
의하여
변성시킨
것을
같은
소화효소를
사용하여
가수분해
시켰을
때의
HPLC
diagram을
서로
비교하여
나타번
과이다
.
a-
lactalbumin과
serum
albumin의
우에도
소화되지
않은
것에
비하여
고정화
펨신
의해
가수분해된
peptide
group들의
나타나
시간이
길어졌음은
물론
peak의
수도
많아졌
으며
모양도
다양하게
나타난
것을
볼수
었고
다시
고정화
트랖신
,
고정화
카이모트잎신
고정화
pronase에
의하여
소화를
진행시킨
peptide
group들의
출현지간은
더욱
늦어졌
으며
peak의
수와
모양도
다양해진
것을
볼수
있었고
,
같은
방법으로
변형시킨
경우일지라도
단액질의
종류가
다를
경우에
변형
나타나는
HPLC
diagram이
서로
다를뿐
아니라
,
변형된
단백질들의
고정화
펨신과
고정화
트랖신
,
고정
카이모트랖신
,
고정화
pronase에
의해
소화
된후
나타나는
peptide
group들의
수와
형대에
각각
다른
양상을
나타내고
있는
것을
볼수
있었다
.
이와같이
같은
조건으로
변형을
시켰을
경우에도
랸멱질의
종류가
다를
경우에
변형되
전의
단백질과
변형된
단백질들의
소화효소
들에
의한
소화상태의
차이가
각각
다른
양상으
나타나는
것은
각각의
단백질의
분자구조상의
차이
같은
조건에서
처리할지라도
떤성의
도나
형태가
서로
다르게
나타날
있고
그-
소화효소에
위해
소화될
있는
위치에
영향
미치는
정도에
차이
있기
때문인
것으로
측할
있다.
그러
단뺙질의
변성의
형태가
소화효소에
V
.
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가수분해
되는
부위에
어떻게
영향을
미치는
가를
구체적으로
설명할
있기
위해서는
소화
생성되어
나타나는
각각의
peptide
group을
순수
분리하여
peptide
group의
1차
구조를
비교하거
아니면
최소한으로
C-
terminal과
N
-
terminal만이라도
비교함으로서
단백질의
변성
형태에
따라
나타나는
소화상의
차이를
더욱
구쩨적으로
설명이
가능할
것으로
생각된다.
】V
.
단백질의
변성이
소화과정에
어떠한
차이를
타내는가를
규명하기
위하여
β-
lactoglobulin,
a
-
lactalbumin과
bovine
serum
al
bumin을
단순
열처리
.
당과
열처리
.
알카리
처리
등으로
각의
.
단백질을
변성시킨후
고정화
휄신,
고정화
트랖신
,
고정화
카이모트랖신과
고정화
pronase
통하여
단계척으로
순환시키면서
가수분해
킨후
생성되는
peptide
group
등을
molecular
sive
HPLC
방법으로
분리하여
서로
비교하였던
바,
결과는
다음과
같다.
1
.
분자사별
HPLC
그래프
식뻬서
벼성되지
$-
lactoglobulin,
a
-
lactalbumin$
bovine
serum
albumin은
단일얀
peak늘
나타내었으며
출현시간은
각각
다른
시간대에
나타났다
.
2.
β
-
Lactoglobuliri,
a-
lactalbumin과
serum
albumin은
단순
열처리
,
당과
열처리
,
알카리
리를
분자사별
HPLC
그래프
상에
나타나는
peak
위치와
수가
다르게
나타났다.
3.
신선한
단백질과
변성된
단백질들은
모두
고정화
소화효소
장치에
가수분해
결과
되는
peptide
group의
출현시간은
길어쳤으며
그수도
많아졌다.
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멤ass
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